产品型号：Col Ⅲ

厂商性质：生产厂家

所在地：上海市

更新时间：2016-06-03

产品简介：

一、性能参数

    使用前*阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

二、“猪Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒”工作原理  

   所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

三、每套试剂盒中内容(96T)

材料 数量

标准品 96T(2vial)

预包被抗体的96孔板 96T（8×12）

生物素标记人ANG抗体 96T (1:100)

ABC（亲和素-过氧化物酶复合物） 96T (1:100)

样品稀释液 96T×2

抗体稀释液 96T×1

ABC稀释液 96T×1

TMB显色液A 96T×1

TMB显色液B 96T×1

TMB终止液 96T×1

ELISA洗涤液 96T×1(1:25)

四、需要而未提供的试剂和器材

1． 37℃恒温箱。

2． 标准规格酶标仪。

3． 自动洗板机。

4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。

5． 蒸馏水，容量瓶等

6． 干净的试管和Eppendof管。

五、“猪Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒”注意事项

1. 从-20℃取出的试剂盒，在4℃解冻guoye。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。

2. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

3. 配制各种试剂时，切记混匀！

4. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

5. 建议所有标准品、样本都做双份检测。

6. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！

7. 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

六、洗板方法

    手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

七、样品的准备和保存

    样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。

血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃guoye，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

八、样品稀释的一般原则

    用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*检测范围。样品的稀释应有详细记录。

九、标本的采集及保存

1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃guo夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
4. 样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。
注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

十、操作程序

1． 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。

3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。

4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。

5． 将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。

6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。

7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。

9． 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应zui长不要超过30分钟）。

10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。

11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。

十一、“猪Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒”计算标本待测因子含量

【特异性】： 系统和其它细胞因子无交叉反应。

【保存】： -20℃ [短期内（如两周）可4℃

【有效期】： 12个月（-777℃）。

【用途】： 用给我留言于体外定量分析液体标本（通用型）

本试剂盒经过充分验证，保证有效且重复性佳。欢迎我司业务员查询价格及优惠信息。