产品型号：VEGF

厂商性质：生产厂家

所在地：上海市

更新时间：2016-05-30

产品简介：

您购买的兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒如有质量问题，我们承诺免费包退换

试验原理

ELISA检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。

产品规格

规格     可测样数 标准孔 空白对照     产地 库存

96T      85个样    10       1         进口 现货

48T      37个样    10       1         进口 现货

自备材料

1）蒸馏水。

2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3）振荡器及磁力搅拌器等。

试剂盒组成

样品收集、处理及保存方法

1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4）组织匀浆-----将组织加入适量shengli盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液

5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。

2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作步骤

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。 每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物 素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3   次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒安全性

1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份

试剂盒选择
◎卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。
◎灵敏度：有二层含义，1)为试剂检出被检物质的zui低量的能力；2)为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力(假阴性越少越好) ，取决于包被物的全面性。
◎特异性：指试剂正确检定不存在的被检物质的能力(无假阳性)，取决于包被抗原(体)及标记抗原(体)
的纯度及特异性。
◎精密度：ELISA 试剂一般指其批内CV，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围试剂盒选择
◎稳定性：试剂在规定条件下能储存的时间，一般采用破坏性试验即将试剂存放于37℃保存，定期测定其灵敏度，特异性和精密度等指标，直到其质量指标开始下降为止，通常认为 37℃每稳定一天相当于4-10
℃保存一个半月。
◎简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性试验中结果判断简单明了，)定量试验结果计算也应简单。
◎安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。
◎经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。
试剂盒评价
◎试剂评价需要有的血清考核盘( Panel)进行检测，一般实验室不易从生检所或临检中心取得，每进一次试剂评价一次也很麻烦。可以通过间接的信息对试剂进行选择。
◎根据该试剂生检所批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；
◎通过询问试剂包被物的组成，如原料来源(基因工程或合成多肽)，片段的组合(按比例混合或化学合成)，片段的长短等判断试剂的优劣；
◎参考室间质评评价报告中对试剂的评价结果，这比较客观公正，因为统计数字均来自各参评医院，反映了试剂在某一地区的使用情况；
◎根据部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。
仪器质控
为使仪器保持*工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序(SOP)，所要控制的仪器包括移液器(加样枪)，水浴箱(温箱)，洗板机和酶标仪。
◎移液器：ELISA 加样量小(5-100ｕl)，其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；
◎水浴箱 经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中(或温箱内)实测温度是否*，允许有±1℃的误差；
◎洗板机 每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；
◎酶标仪 经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。
附1：酶标仪校正程序
◎滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，用UV-2201 型紫外-可见分光光度计(波长精度±0.3nm)于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。
◎通噵差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体，将其(内含200ul 甲基橙溶液吸光度调至0.500A 左右)置于8 个通道的相应位置，蒸溜水调零，1 于490nm处连续测三次 ,观察其不同通道的检测器测量结果的*性，可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同
一厂家，同一批号酶标2 板条(8 条共96 孔)分别加入 200ul 甲基橙溶液(吸光度调至0.100A 左右)先后置于同一通道，蒸溜水调零,于490nm 处检测，其误差大小用±1.96s 衡量。n 零点飘移(稳定性观察)：取8 只小孔杯分别置于8 个通道的相应位置，均加入200ul 蒸溜水并调零，于490nm 处每隔30 分钟测一次，观察各个通道4 小时内吸光度的变化。
附 1：酶标仪校正程序
◎精密度评价：每个通道3 只小杯分别加入200ul 高中低3 种不同．浓度的甲基橙溶解，蒸溜水调零，于490nm作双份平行测定，每日测二次(上下午各一次)，连续测定 20 天。分别计算其批内精密度，日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的CV 值。
◎线性测定：用电子天平精确称取甲基橙配制 5 个系列的溶液，于490nm 平行测8 次，取其均值。计算其回归方程，相关系数及标准估计误差 s，并用±1.96s 表示样品测量的误差范围.双波长测定评价：取一分甲基橙溶液，分别加入3 种不同浓度的溶血液(测定波长为 490nm，校正波长为585nm)，先后于8 个通道
检测，每个通道测3 次，51 比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。
◎一般酶标仪无 585nm 滤光片，可选用550nm 或630nm 滤光片。450nm 滤光片的检定选用普鲁兰溶液(校正波长为630nm)

兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒说明 
1. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
2. 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。
3. 试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签上的标示为准。
4. 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 
5. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 
6. 中、英文说明书可能会有不*之处，请以英文说明书为准。
7. 所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
8. 有效期：6个月