对elisa实验有了解的朋友们知道，它可以用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三种（固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体、酶作用的底物）必要的试剂，我们根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
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 在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法测定中，应注意钩状效应，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
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