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日期:2014-02-25浏览:675次
坐在窗子旁边能听见雨水滴落的声音,又近乎中午,仿佛今天才刚刚开始。也就是差不多一个小时前,王接到了技术人员发来的邮件,这是一个实验的过程。您看到本文的标题定知晓是什么实验了,下面我们就进入今天的主题来说,银河集团9873.cσm与您雨日畅谈抽提蛋白质的那十一个环节。
在步骤环节之前,这里先跟您简略的说明一下,蛋白质在细菌中表达后,以反复的冷冻-解冻方法打破细胞,再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来,此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。那么实验的那十一个步骤是怎么样的?
1、挑取培养皿上单一菌落,培养在15 mL 的LB/amp/kan 液体培养基中,以120 rpm 转速震荡,在37℃下培养经过一个晚上。
2、取上述菌液6 mL加入300 mL新鲜LB/amp/kan培养基中,以120 rpm 37℃培养至A600 = 0.6 后,加入IPTG成为1 mM浓度,继续以120 rpm在37℃震荡培养4 h。
3、将菌液倒入50 mL 离心管 (conical tube) 中离心10 min (5 000 rpm)。
4、倒去上清,可将菌块连同离心管置 -20℃冰箱贮存。
5、取出含菌块的离心管置碎冰上,待菌块溶解后,以残存液体均匀悬浊的。再加入10 mL lysis buffer 轻轻悬浮的。
6、将菌液放在液态氮中冷冻1 min,然后在37℃水浴中摇荡溶解的。如此反复三次,尽量不要产生大量气泡。将离心管的内容物倒入50 mL 高速离心机的离心管内。
7、离心20 min (12 000 rpm,4℃) 取上清共 _____ mL,称为 粗抽取液 (XT);预留100 μL 以便日后一起进行分析。此后样本均得放置碎冰上,以低温进行实验。
8、此上清加入5 mL buffer A-0 混匀后倒入烧杯,置碎冰上放冷,不时搅拌并缓缓加入固体硫酸铵 _____ gm,使成为70%饱和度,加完后再搅拌10 min。
9、离心20 min (12 000 rpm,4℃) 后小心倒去上清,取白色沉淀部份。
10、沉淀加以2 mL buffer A-150 均匀悬浊的,再以桌上型离心机去除不溶物质,(10 000 rpm,5 min),共得 ______ mL,称为 全蛋白质 (TP);预留100 μL,连同上述XT 置4℃冷藏。
11、其余溶液部份准备进行胶体过滤层析,标示清楚后置4℃冷藏。
以上就是实验的十一个步骤,银河集团9873.cσm感谢您的支持!二月尾巴啦,需要购买产品的朋友们抓紧来电哦!因为我公司的近期*还在进行中,会送小礼物哦。实验已经结束了,您一定想知道,实验中需要用到哪些仪器与试剂呢?上海沪鼎还特别为您整理出了仪器试剂等数据列表。
恒温震荡培养箱37℃;高速冷冻离心机及离心管 (使用20,000 rpm离心陀)使用高速离心机要注意: 离心机及离心陀的温度要预冷*,相对位置的两只离心管要平衡好,离心陀转速不能超过zui高速限;液态氮及冰筒;37℃温水浴。
需要用到的试剂有:LB amp kan液体培养基、IPTG、Na3PO4·12H2O、NaCl、EDTATriton、X-100液氮。银河集团9873.cσm的产品价格是保证的哦!并且有,购买我公司试剂在实验过程中如果遇到了不懂的问题可电询。