李燕红 杨 谦 李锦亮 庄锦填 李振洁 钟金宝

【摘     要】   目的     探讨加味当归芍药散抑制组蛋白乙酰化酶ｐ３００（ｐ３００ＨＡＴ）／血清环加氧酶－２（ＣＯＸ－２）通路调控核因子 Ｅ２相关因子２（Ｎｒｆ２）在黄褐斑形成中的作用机制。方法     健康人表皮黑素细胞及３０只雌性小鼠纳入研究，采用不同浓度加味当归芍药散处理健康人表皮黑素细胞，肌肉注射及紫外线照射建立黄褐斑小鼠模型，将小鼠随机分为空白组、低剂量组及高剂量组各１０只，分别给予常规剂量０．９％氯化钠注射液、低剂量及高剂量加味当归芍药散处理，检测不同浓度处理下细胞活力、细胞黑素含量及细胞中ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表达量，同时检测治疗前后３组小鼠皮肤及肝脏的ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ、蛋白质表达量。结果加味当归芍药散浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ 时健康人表皮黑素细胞活力较对照组明显低，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０５）；加味当归芍药散处理的健康人表皮黑素细胞ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２的 ＲＮＡ 及蛋白表达量和黑素相对含量较对照组明显低，Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表达量较对照组明显高，且随着加味当归芍药散浓度增加，健康人表皮黑素细胞 ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２、Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表达量降低、升高越明显，健康人表皮黑素细胞黑素相对含量降低越明显，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０５）；治疗后仅低剂量、高剂量组ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２的 ＲＮＡ、蛋白表达量较治疗前明显降低，Ｎｒｆ２的ＲＮＡ、蛋白表达量明显升高，且治疗后高剂量组各项指标变化较低剂量组明显，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０５）。结论   加味当归芍药散治疗黄褐斑的机制可能与其抑制ｐ３００ＨＡＴ／ＣＯＸ－２通路调控 Ｎｒｆ２表达有关。

【关键词】   黄褐斑； 环氧化酶２； 加味当归芍药散； ｐ３００ＨＡＴ； Ｎｒｆ２

黄褐斑属于临床常见面部皮肤黑色素沉着疾病，易诊难治，病因与日晒、内分泌失调、遗传、情绪 及化妆品等有关，临床对其治疗尚缺乏单一药。近年来，运用各种中药治疗黄褐斑并取得了一定的临床疗效［１］。现阶段临床对黄褐斑发病机制尚未*明确，一项研究表明环加氧酶－２（ＣＯＸ－２）催化花生   四烯酸合成的具有生物学活性的前列腺素衍生物可进一步转化成消炎、抗氧化的亲电羰基衍生物分子， 并可解离转录因子核因子 Ｅ２ 相关因子２（Ｎｒｆ２），激活多种与抗氧化相关的含抗氧化反应元件（ＡＲＥ）应答元件的基因，ＣＯＸ－２调控 Ｎｒｆ２可能与其抗炎及抗氧化机制有紧密联系［２］，其在黄褐斑形成中可能发挥一定作用，此 外 ＣＯＸ－２ 的表达与共激活因子ｐ３００ＨＡＴ 的转录调控相关［３］。而近期一项研究指出当归芍药散具有显著的抗氧化、清除自由基等作用［４］，因而本项目在既往研究基础上开展检测加味当归芍药散作用人表皮黑素细胞生长情况以及组蛋白乙酰化酶ｐ３００（ｐ３００ＨＡＴ）、ＣＯＸ－２ 及 Ｎｒｆ２ 的表达水平，并建立黄褐斑小鼠模型，对其实行加味当归芍 药 散 灌 胃 处 理 ， 并 检 测 小 鼠 皮 肤 、 肝 脏 的ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２ 的表达水平，通过体外细胞实验及体内动物实验研究，探讨加味当归芍药散治疗黄褐斑的有关机制。

１ 材料与方法

１．１  材料：３０只雌性昆明种小鼠由上海西普尔－必凯实验动物中心提供，小鼠体质量１８～２０ｇ，平均体质量（１９．６±０．３）ｇ；健康人表皮黑素细胞株由中南大学湘雅医学院肿瘤研究所提供。主要试剂及仪器：①主要试剂：由南京建成生物工程有限公司提供的丙二醛试剂盒（批号：２０１３０５１７）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）试剂盒（批号：２０１４０３１９）、总蛋白定量测试盒（批号：２０１４０３１９），由中国·银河集团-WWW.9873.cσm|官方网站提供的酪氨 酸 酶 酶联 免 疫 吸 附 试 验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒，由上海通用药业股份有限公司提供的注射液（批号：１３０４０４），四甲基偶氮唑蓝、二甲基亚砜由上海华美生物工程公司提供；②主要仪器：中波紫外线治疗仪由 Ｓｉｇｍａ 公司提供，ＤＧ３０２２Ａ 型酶标仪由华东电子管厂提供，由美国Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司提供的 Ｄｉｒｅｃｔ－Ｑ 型超纯水仪，德 国ＩＫＡ 公司提供的ＩＫＡ Ｔ１８Ｂ 型组织匀浆机，美国Ｂｅｃｋｍａｎ公司提供的 Ｃｏｕｖｔｅｒ高速冷冻离心机。

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