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日期:2015/4/7浏览:497次
小鼠血管内皮生长因子试剂盒操作手册--银河集团9873.cσm
一、实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠血管内皮生长因子 (VEGF)水平。用纯化的小鼠血管内皮生长因子 (VEGF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮生长因子 (VEGF),再与HRP 标记的血管内皮生长因子 (VEGF)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子 (VEGF)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠血管内皮生长因子 (VEGF)浓度。
二、标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
标本收集:
1.收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血浆抗凝剂推荐使用EDTA。避免使用溶血,高血脂标本。
3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃,-70℃电冰箱内,避免反复冻融,3-6月内检测。
在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
三、“小鼠血管内皮生长因子试剂盒"操作示意图
操作指南:固相包被→加待测样品→温育→洗涤+加酶标物→温育→洗涤→加底物→温育一加终止液→比色→判定结果
四、注意事项
1.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
2.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
3.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
产品说明:本试剂盒仅供研究使用。