大鼠ELISA试剂盒加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。应当注意以下几点

1．血清：
标本请于室温放置2小时或4℃过液后于1000g，4℃离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．细胞培养物上清：
细胞培养物于室温1000g，离心10分钟后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
3．组织匀浆：
将组织标本先用PBS洗涤，除去多余血液，匀浆化后放在PBS于-20℃放置过液，再经过二次反复冻融破膜，5000g，4℃离心5分钟，取上清即可检测。
4．血浆：
ELISA试剂盒可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8℃,1000g离心15分钟，小鼠ELISA试剂盒或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
5．尿液：
无菌收集取初尿，离心除去沉淀物，即可用于检测，要长期保存尿样，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿样冰冻保护液放入-20℃冰箱长期保存。

操作步骤：

1.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
3.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6.温育：操作同3。
7.洗涤：操作同5。
8.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
9.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
10.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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