日前，我公司钱在售后问题处理过程中，接到了遵义医学院许老师的实验，在问题描述中，许老师问道：“我做的ELISA没有试剂盒，都是自己包板封闭孵育。做了很长时间，标准曲线的梯度都不好。刚加完显色剂的时候梯度还算明显，但是显色比较浅，随着时间延长(大概6、7分钟)以后梯度就不明显了。终止反应后测得的值梯度就没有了。"请问这是怎么回事？

    关于许老师的疑问，钱为之安排的技术员解析道：

    ①样本中有能够催化底物的物质，没洗下来。

    ②包被、酶标重新做梯度，先用较低的浓度把梯度摸索好，然后再优化灵敏度，zui后调出所需的灵敏度、线性范围。

    ③是不是酶浓度太高，导致zui后显色结果都是高的？

    ④包被-酶标系统不匹配或者酶标的非特异反应太强，或者酶标仪读数范围不够，或者干脆酶标仪坏了。

    ⑤有条件的话，可以把酶免的蛋白系统移植到板式化学发光上，加完底物三分钟读数，这样可能比较适合你。

    ⑥酶是自己标的么，见过有人把酶给标坏了出现这种情况的，HRP的话，比例不要太高，酶挂的太多了也不好的。 

    ⑦刚加完显色剂时梯度明显：显色液是不是从高浓度向低浓度孔加的啊。

    ⑧蛋白系统灵敏度够的话，显色十分钟就差不多了。

    看到我公司的问题分析内容后，许老师再赞上海沪鼎的服务效率好。以上内容就是钱今天给大家带来的新学期ELISA曲线问题解析，了解更多。