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上海沪鼎教您处理ELISA试剂盒的六大重点标本

日期:2014-12-05浏览:1164次

    为什么ELISA方法那么受欢迎?因为其优点多,易操作,能够检测数种标本。然而,能够影响到ELISA实验结果的因素有很多,其中就包括标本的处理。但是不同类型的标本处理方法不同,这也就是今天的重点资料内容了。上海沪鼎教您处理ELISA试剂盒的六大重点标本:
一、尿液、唾液 
    1000×g离心20min,取上清即可检测。但由于ELISA只能检测可溶性蛋白的含量,应保证所有样本均为澄清的液体,沉淀或悬浮物都应离心去除。为了保证检测的准确性,保存于-20℃或-80℃的样本在1~6个月内检测;4℃保存的样本应在1周内进行检测。
    注意:还应保证样本不含NaN3,因为NaN3会抑制HRP的活性,从而导致假阴性的结果。
    
二、细胞裂解液
    ① 吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
    ② 收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。
    ③ 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
    ④ 将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
    ⑤ 4℃10000×g离心10min,除去细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
   
三、细胞培养上清
    取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
四、组织匀浆液
    ① 将组织样本用PBS(0.01M, PH 7.4)冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。
    ② 将组织块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于匀浆得更充分
    ③ 将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆时置于冰上或冰浴中。(通常按组织重量:PBS体积=1:9的比例匀浆)
    ④ 吸取匀浆液到离心管,4℃5000×g离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。

五、血清
    用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃放置一个晚上,使血清析出。(将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的析出)4℃1000×g离心20分钟,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
    注意:采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。

六、血浆
    用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
 
    以上就是ELISA实验的六大重点检测标本的处理方法,方法用对了才能够保证实验效果哦!当然啦,操作中还需要您认真对待与足够的耐心。本公司可为您提供ELISA试剂盒免费代检测服务,上海本地还可以上门取样哦!

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