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银河集团9873.cσm实验肺炎衣原体过程,让我们用elisa法来检验

日期:2014-03-13浏览:1153次

    检验肺炎衣原体?我们知道elisa实验是比较常用的,具有属于自己的优点与特点,被常用于免疫学检验中。今天我们要带领大家了解的一个实验就是相关检验肺炎衣原体,下面就来看一看,银河集团9873.cσm实验肺炎衣原体过程,让我们用elisa法来检验。
    我们这个实验的标本需要取新鲜末梢血或静脉血。如采血后24h内不能进行试验,分离血清后将其保存于一20℃环境中。在做检测实验的时候,使样本恢复至室温。
实验中所需要用到的试剂:
1、浓缩酶联物;
2、标本稀释液;
3、终止液;
4、阳性对照;
5、弱阳性对照;
6、预包被微孔板;
7、底物A、B;
7、阴性对照。
    选用elisa方法,血清加到包被纯化的肺炎衣原体抗原的微滴孔中,使之发生反应,然后去除未结合的抗体,加入结合有HRP的抗人Ig抗体使之与已结合的抗体反应,结合的HRP与发色底物发生颜色反应。zui后,终止底物反应,在酶标仪上读出光密度值。
实验检验过程:
1、配制洗涤液 l瓶浓缩洗涤液加475ml蒸馏水。配好的洗涤液短期内可置室温环境中,长期可存于2—8℃环境中。
2、配制酶联物 按1:101倍稀释,即取1u1浓缩酶联物加酶联物稀释液1 000ul(根据检测标本数量确定稀释量),未用完的丢弃。
3、待试剂盒平衡至室温后,待测标本按1;51稀释,即取4tA血清与200u1标本稀释液混合。
4、将稀释标本置37℃环境中20min。
5、各加100ul阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中,空白对照孔加100u1标本稀释液,盖好反应板,置37℃环境中30min。
6、甩尽板中液体,每孔用200~300ul洗涤液洗5次,每次均需拍干。
7、每孔加酶联物100~1,盖好反应板,置37℃环境中30min。
8、甩尽板中液体,洗5次,每次拍干。
9、加底物A、B各1滴或各50tzl,混匀,置37℃环境中15min。
10、取出,加终止液1滴,用酶标仪450nm测其OD值。若肉眼观察则不加终止液,直接判断结果。
实验过后,我们要做一个结果判断:
1、阴性对照平均OD值须小于0.20。
2、弱阳性对照平均OD值须在0.20—0.65。
3、弱阳性对照与阴性对照的平均OD值之比须≥2。符合以上3个条件时,本试验结果可信,否则重复实验。
4、若待测标本孔显色比弱阳性对照孔深则判为阳性,反之为阴性。但在弱阳性对照值上下10%范围内再测1次,如确实高于弱阳性对照则可判为阳性。
    以上就是我们为您分享的实验全过程啦,银河集团9873.cσm在这里为大家说几个实验中的注意事项,这个实验结果须结合临床表现、病史作出诊断后,方可采取适当临床处理。还有就是试剂盒虽然含有消除干扰因子的物质,但仍可能有少量标本难以除尽干扰。因此,如某标本多项IgM均为阳性,应考虑RF的干扰。
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