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成人胰腺消化、胰岛分离方法
日期：2013-04-01浏览：1746次
简述成人胰腺消化、胰岛分离方法：
尸体胰腺原位灌洗后置UW液中，4℃保存运输。到实验室后在4℃ Euro-Collins液中清除非胰组织，从胰管内插入穿刺针，丝线缝扎后用注射器灌注Liberase酶溶液（1.5 mg/ml）。胰腺充分膨胀后将胰腺切片，置消化罐中并放入数颗玻璃珠，加500 μm 孔径的不锈钢丝网，旋紧罐盖。开启蠕动泵将剩余的Liberase酶溶液泵入罐内，控制罐内温度37℃，手动振摇消化罐循环消化，于10分钟后开始取样镜检，待大部分胰岛分离后用冷的含10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养液降温稀释终止消化。收集消化物用10% FBS 1640离心洗涤，将消化物混悬于150 ml UW液中，4℃冰浴30分钟。
加载1.100 Ficoll到COBE 2991细胞掏洗机，从COBE排除空气，启动COBE 旋转2,400 rpm，分别加1.100和1.077的Ficoll到梯度形成仪，将混合形成的连续梯度液泵入COBE，再泵入含组织UW液，zui后泵入Hanks液，让COBE 在2,400 rpm转5分钟后分管收集纯化后的组织，镜检各管，将含有胰岛的各管组织合并，用10% FBS 1640离心洗涤两次，取样做胰岛鉴定和计数。
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