人ELISA试剂盒实验操作中，须特别注意细节问题，细节往往决定着试验的成功与否。关于ELISA试剂盒的实验操作，这些细节很重要：

1、吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，人ELISA试剂盒吸取的量不够准确。

2、吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸，减少误差。

3、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

4、合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

6、未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液。

7、要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。

8、每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

9、手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。

10、样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。

11、为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

12、ELISA试剂盒实验中，加样后及时放人孵箱，标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗che底。

13、剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

14、对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。

15、没有去离子水或双蒸水时，可以使用娃哈哈纯净水配制溶液，切勿使用自来水。

16、在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换枪头，即使吸取标准品溶液。

17、人ELISA试剂盒洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。