【预期用途】

仅供科研使用，用于检测血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液等相关样本中甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）的表达。

【检测原理】

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过che底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）的存在与否。

【操作步骤】

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）。

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

8. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10-20分钟。

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

【注意事项】

1. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

2. 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

3. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。  

4. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm。

5. 显色时间供参考，因用户实验室条件差异，最佳显色时间会有所不同。

6. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

7. 本试剂不同批号组分不得混用。

8. 揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。