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日期:2020-09-10浏览:1284次
很多小伙伴买到血清的时候会出现沉淀现象,什么是沉淀呢?沉淀会影响使用吗?沉淀和血清质量有关吗?该如何处理沉淀呢?接下来和小编一探究竟吧!
1.什么是血清沉淀?
血清中经常会出现肉眼可见的沉淀,其成分有多种类型,产生的原因有很多,主要有纤维蛋白、磷酸钙还有一些其它成分。
① 纤维蛋白(Fibrin)
血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中,血清采集、过滤(3 次 0.1 μm过滤)和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原(Fibrinogen)处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。
下图是血清因反复冻融而造成纤维蛋白原的凝集
② 磷酸钙(Calcium Phosphate)
这是一种常见的沉淀成分,通常会造成血清出现云雾状浑浊。当产品在 37℃保存时,这种现象尤其明显,在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动,常被误认为是微生物污染。
③ 其他成分(Other)
血清中的其他成分也会形成沉淀,例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等
2.血清沉淀会影响细胞培养吗?
① 细胞生长
我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试,确保血清质量达到严格标准。血清测试和细胞培养经验也表明,其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多客户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。
② 怀疑污染
磷酸钙颗粒经常会被当成微生物污染而引发不必要的担忧。一般情况下,当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时,常将其存放在 4℃冰箱中观察,并考虑接下来是否继续使用。但这样会使沉淀进一步增多,反而会使血清更加浑浊,进而误以为存在血清污染。并且,在倒置显微镜下,可在血清中观察到四处游动的小黑点(磷酸钙颗粒的布朗运动),更容易使人误以为存在微生物污染。
为防止这类误解的产生,我们不建议客户培养血清来验证是否存在污染,而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养,以观察是否有细菌的增殖。并且,进行革兰氏染色,并在油镜(100 X 10 倍)下观察可直接确认是否存在微生物污染。
3.怎样操作可以尽量避免沉淀出现?
① 解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃,实验显示非常容易产生沉淀物。
② 解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生
③ 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
④ 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
⑤ 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理? 欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
4.出现血清沉淀该如何处理?
我们建议您采用2000 rpm 离心5分钟,取上清使用就好,比过滤方便,不需要另外准备滤心和针筒,又不容易污染。
5.总 结:
血清产品中出现沉淀属于常见现象,但不会影响血清的品质,对细胞培养而言也是没有任何问题的,大家可以放心使用!
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